La enfermedad de Chagas corresponde a una infección parasitaria causada por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi. Éste posee una gran diversidad genética y en la actualidad se divide en seis Unidades Discretas de Tipificación (DTUs) denominadas TcI - TcVI. La enfermedad puede ser originada por cualquiera de los genotipos o DTUs ya que son infectantes para los humanos. Los métodos de diagnóstico de la parasitemia T. cruzi pueden incluirse en tres grupos principales: parasitológicos, serológicos y moleculares. No obstante, durante la fase crónica, caracterizada por un número reducido de parásitos en circulación, los dos primeros métodos presentan limitaciones para el diagnóstico de rutina. Las pruebas parasitológicas pueden presentar baja sensibilidad y los ensayos inmunológicos pueden presentar problemas de baja especificidad debido principalmente a reacciones cruzadas con otros parásitos relacionados, como Leishmania spp. y T. rangeli. Es por ello que las técnicas moleculares han mostrado resultados prometedores para caracterizar la diversidad de los aislados de T. cruzi. En un estudio previo en nuestro laboratorio, pusimos a punto el protocolo de Da Cruz Moreira y Ramirez (2019) para tipificar las DTUs de Trypanosoma cruzi a partir de sangre entera de pacientes chagásicos crónicos de la Provincia de Misiones mediante PCR convencional. En concordancia con lo descripto por los autores, hemos logrado detectar las diferentes DTUs a pesar de que la carga parasitaria sea muy baja durante la fase crónica. Sin embargo, con dicho protocolo son necesarias múltiples reacciones de PCR convencionales y posteriores reacciones de secuenciación lo cual torna a estas pruebas engorrosas, requieren mucho tiempo y los resultados son difícil de interpretar debido a la presencia de bandas inespecíficas. Por lo tanto, para resolver este inconveniente es que nos proponemos poner a punto una técnica de alta sensibilidad como la PCR en tiempo real, que permita la distinción de las seis DTU en unos pocos pasos en muestras biológicas y clínicas.
Palabras claves: Enfermedad de Chagas, Trypanosoma cruzi,
Fecha de inicio: 01-01-2022
